Noggin和BDNF基因修饰的BMSCs、羟基红花黄色素A、重复经颅磁刺激对血管性痴呆大鼠作用机制的研究
卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对认知障碍模型的治疗及可能作用途径
Alzheimer's病中叶酸缺乏诱导的DR4启动子区低甲基化和高表达以及DNMTs表达上调
治疗神经退行性疾病的多靶点药物分子设计、合成与药理活性评价
Noggin和BDNF基因修饰的BMSCs、羟基红花黄色素A、重复经颅磁刺激对血管性痴呆大鼠作用机制的研究
基因修饰羟基红花黄色素A对认知障碍模型的治疗及可能作用途径
Noggin和BDNF基因修饰的BMSCs、芦荟大黄素对血管性痴呆大鼠作用机制的研究
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Aβ1-42对大鼠胆碱能神经元NOX2的影响及二氮嗪干预研究
CHIP促进心肌素泛素化和降解及抑制平滑肌细胞分化的分子机理
龟鹿二仙膏补肾抗衰的实验研究及“气助阴生阳长”的理论探讨
治疗神经退行性疾病的多靶点药物分子设计、合成与药理活性评价
磁刺激对小鼠原代海马神经元突触可塑性相关蛋白和钙信号转导机制影响的研究
摘要：目的：①建立大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)的分离、培养及基因转染技术；②筛选BMSCs、Noggin和脑源神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)基因修饰的BMSCs、羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A, HSYA)口重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation, rTMS)等干预血管性痴呆(vascular dementia)大鼠的方法,结合大鼠空间记忆力和海马区血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达分析其效果；③将大鼠海马区长时程增强(long-term potentiation, LTP)与BDNF和N-甲基-D-天门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor, NMDAR)不同亚单位的表达结合,分析VaD大鼠空间记忆改善的机理。方法：①提取大鼠长骨骨髓中的BMSCs,对其进行传代培养,通过MTT等方法计算细胞活力,通过流式细胞技术、成骨诱导和成脂诱导技术对其进行鉴定；②选取第3至第5代的BMSCs进行Noggin和BDNF基因转染,以VVestern blotting(?)勺方法检测BMSCs目的蛋白的表达；③采用2VO法制作VaD大鼠模型,实验动物随机分为正常组、假手术组、模型组、PBS组、生理盐水组、BMSCs组、Noggin修饰BMSCs组、BDNF修饰BMSCs组、HSYA组和rTMS组；④对造模后1周的VaD大鼠分别给予BMSCs移植、转染Noggin的BMSCs移植、转染BDNF的BMSCs移植、HSYA尾静脉注射2周和高频rTMS4周；⑤造模后5周行水迷宫实验检测各组大鼠的空间记忆功能,行LTP实验检测各组大鼠海马区的突触可塑性,以Western blotting的方法检测各组大鼠海马区VEGF、 BDNF、NR1、NR2A和NR2B的表达,以HE染色观察各组大鼠海马区的结构,以免疫组化的方法检测各组大鼠海马区VEGF和NR1的表达。结果：①通过一般形态学的观察、流式细胞技术、成骨诱导和成脂诱导等鉴定方法显示,贴壁法分离、培养BMSCs可以有效达到纯化的目的；②通过荧光显微镜下观察和Western blotting法检测目的蛋白的表达,显示重组腺病毒Ad-GFP-Noggin和Ad-GFP-BDNF转染BMSCs,可使BMSCs高效表达Noggin和BDNF;③HE染色结果显示2VO法制作血管性痴呆模型,可以模拟人类血管性痴呆的病理表现,而各干预组均可使其病理变化得到改善；④水迷宫结果显不BMSCs移植、Noggin和BDNF转染BMSCs移植、HSYA和rTMS均可改善VaD大鼠的空间记忆功能,且Noggin和BDNF转染BMSCs组优于单纯给予BMSCs组；⑤Western blotting和免疫组化的结果显示,VaD模型组大鼠海马区VEGF表达轻度上调,HSYA和BDNF转染BMSCs可以显著上调VEGF的表达,其余各干预组增加VEGF表达的作用相对较小；⑥LTP结果显示,各干预组均明显优于VaD模型组,以Noggin、BDNF转染BMSCs组和rTMS组为著；⑦Western blotting和免疫组化的结果显示各干预组均可使海马区BDNF、NR1和NR2B的表达上调,以BDNF转染BMSCs组和rTMS组为著,而各组对NR2A均无显著影响。结论：①贴壁筛选法分离、培养大鼠BMSCs,可获得纯度和活力均较高的BMSCs;②Noggin、BDNF对BMSCs的存活和分化具有重要意义,有望临床应用神经营养因子基因转染BMSCs治疗神经系统疾病；③BDNF基因修饰的BMSCs既能修复受损的记忆功能和突触效能,又可促进血管生成,其总体效果优于单纯的BMSCs移植和Noggin基因修饰的BMSCs移植,对VaD有良好的治疗前景；④HSYA可明显促进血管生成,rTMS可显著调节突触可塑性,有望将二者联合用于临床治疗VaD患者；⑤LTP的形成与BDNF和NMDAR有密切关系,其中NMDAR主要是NR1和NR2B的活化,而不是NR2A; BMSCs、Noggin基因转染BMSCs、BDNF基因转染BMSCs、HSYA和rTMS可能都是通过此途径而改善VaD大鼠的空间学习记忆能力。
