常德地区禽流感疫情监测分析与防治

 关键字：禽流感； 检疫； 防控

 Changde region monitoring analysis and control bird flu outbreaks

Abstract: Chang DE city has the country's largest chicken &duck trading market, circulation management difficult, easily into the epidemic, constant threat and breeding industry, and the city is facing new challenges. The author in June 2010 between October 2010 on bird flu adopts HA, HI test method for the serologic test. Test results indicate that so far hasn't happened, but avian flu epidemic prevention and control the situation is still severe. Type A highly pathogenic (AIV can be divided into ` HPAI) low pathogenic (certain) and the pathogenic (NPAI) three categories. HPAI because its spread quickly, the damage is the world organization for animal health as A class infectious diseases. The occurrence of birds are epidemic disease is more and more frequent, the region also more and more influence by the outbreak, more widely. Bird flu in direct and indirect cause huge economic losses, but also threatens the human life safety. As a kind of bird flu in poultry drug-infested, zoonoses, has become a major public health problem.

Key words: Avain in-fluenza，AI; quarantine；protection；

1 前言

1.1 禽流感的危害

禽流感是由禽流感病毒引起禽类的急性传染病，既可发生于禽类，又可发生于哺乳动物。今年来，禽类感疫情的发生越来越频繁，发病的地区也越来越多，受疫情影响的范围越来越广。禽流感在造成巨大直接和间接经济损失的同时，也威胁着人类的生命安全。禽流感作为一种对人，家禽危害严重的人畜共患病，已成为重大的公共卫生问题。自1878年Perroncito首次报道AI发生到现在，该病已呈全球性分布，许多国家和地区都有该病发生的报道，1959年以来，全世界共暴发了21次高致病性禽流感（HPAI），其中16次是在鸡群中暴发的，每次HPAI的暴发都造成了严重的损失。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率高，感染的鸡群可达到100%死亡。对世界各地的养禽业造成毁灭性打击，造成的损失相当严重。因此，为切实掌握我市禽流感疫病强制免疫的真实效果，预测动物疫病的流行规律，为防控日益严峻的疫病频繁发生的形势，今年我市狠抓了禽流感疫情监测。AI的防控是一项系统工程，涉及疫苗免疫、监测、卫生防疫和饲养管理等的各个方面。本实验通过免疫抗体水平监测及时掌握群体免疫动态，开展AIV情况检测，筛选出隐性感染带毒并实行隔离淘汰，结合卫生消毒、饲养管理等综合防控措施，有效控制和净化了禽流感疫病，为我市制定禽流感防控措施提供了科学的依据。1.该市AI近年来疫情现状。2.AI疫情检测及免疫抗体检测情况。3.检测结果分析。4.存在的问题及分析。5. 建立良好防控体系的对策。6. 建立良好防控体系的积极作用。

1.2 禽流感的产生

    该病于1878年首次发生于意大利，以后国内外不少学者都相继报道了该病的发生及其给养鸡业造成的巨大经济损失。H9N2亚型禽流感是目前世界上分布最广泛的禽流感病毒亚型。H9N2亚型禽流感病毒最早于1966年从北美的火鸡体内分离得到，该亚型的流感病毒最初只感染火鸡，几乎不感染鸡。但从2O世纪90年代以来，H9N2亚型禽

  流感病毒就在亚洲很多养鸡场传播开来。该病目前已流行于世界上许多国家和地区，给养禽业造成了巨大的经济损失。根据AIV对禽类致病性的差异，可将AIV分为高致病性禽流感病毒(HPAIV)和低致病性禽流感病毒(LPAIV o 1878年，Perroncito~,录了发生于意大利鸡群的实际上为禽流感的一种严重疫病，当时称之为鸡瘟，1901年Centanni分离和描述了该病的病原，但直到1955年才证实为A型禽流感病毒。以后，不断有分离到流感病毒的报道。有关病毒可引起鸡、火鸡和其它禽类高度致死。1981年，在美国马里兰~HBeetsville召开的第一届国际禽流感学术讨论会上建议废除“鸡瘟”病名，改称高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influena，HPAI o 1 959—2003年，全球共暴发高致病性禽流感30余次，如：1959年报道发生于英格兰的高致病性禽流感暴发；1991年英格兰一个火鸡群暴发禽流感；1997年中国香港发生高致病性禽流感，不仅引起大批感染鸡的死亡，而且导致18A受感染，其中6人死亡。2005年以来亚洲地区禽流感大面积、多国家同时暴发，与候鸟的迁徙散毒不无关系，欧洲和非洲的禽流感也可能与候鸟迁徙有关。2005年5月，我国从青海湖发病死亡的斑头雁、鱼燕等候鸟体内分离到H5N1亚型禽流感病毒。2006年2～3月，瑞典、波兰、捷克分别报道了在病死的野鸭和天鹅体内发现H5N1亚型禽流感病毒的消息。也许因为候鸟以及水禽的相互作用，才使得高致病性禽流感疫疫情传播具有速度快、范围广以及跳跃性强等特点。HPAIV导致

的禽流感多以突然死亡和高死亡率为主要特征，常导致感染鸡群的全群覆没，从而引起人们的极大关注，迄今发生的高致病性禽流感(Highly Pathogenic AvianInfluenza，HPAI)均由H5和H7这两个亚型的病毒引起的，而且HPAI己被世界动物卫生组织列为A类烈性传染病，在我国其也被列为一类动物疫病。LPAIV导致的禽流感常以呼吸道症状，产蛋率、受精率及孵化率下降为主要特征。目前，在LPAIV中存在最为广泛的、最具危害性的病毒就是H9N2亚型AIV。

1.3 禽流感病毒的理化特性

    AIV对外界环境的抵抗力不强，对高温、紫外线、各种消毒药敏感，容易被杀死。一般条件下AIV热稳定性较差，其活性丧失的先后顺序为感染性、NA酶活性、HA活性，如在4～40℃条件下，感染性极易丧失，在一10℃ ～一40℃条件下60d以上，红细胞凝集活性极易丧失，一7O℃下可保存数年，冷冻干燥后于4qC下可长期保存。由于AIV为有囊膜病毒，故对脂类溶剂较敏感。阳光直射40～48h可灭活病毒。若用紫外线直接照射，可迅速破坏其感染力、血凝素活性和神经氨酸酶活性。流感病毒可以在自然环境中，特别是在凉爽和潮湿的条件下存活很长时间。粪便中病毒的传染性在4℃条件下可以保持长达30～50d，20~C时为7d。因此严重污染的粪便是控制流感病毒时存在的主要问题。在野外条件下，禽流感病毒常从感染禽的鼻腔分泌物和粪便中排出，病毒受到这些有机物的保护，极大地增加了抵抗力。某些蛋白酶对禽流感病毒的感染性有很大的影响，如用菠萝蛋白酶和胰凝乳蛋白酶处理病毒，可使其感染性及血凝素活性全部丧失，但用胰蛋白酶处理病毒，其感染性不受影响，有时反而有所增强。这是因为前者可破坏病毒粒子上的HA，使病毒不能吸附于宿主细胞上，从而使其感染性和血凝素活性丧失，而用胰蛋白酶处理病毒能将HA降解为HA1和HA2，这是病毒感染所必须的一个过程，因此其活性不仅不受影响，反而会增强。

1.4 禽流感病毒的变异

    AIV遗传变异极为频繁，血清亚型众多。诱发AIV发生变异的主要机理有：(1)抗原漂移。基因组自发的点突变引起小幅度的变异，积累到一定程度或正好是抗原决定簇发生改变；(2)抗原转变。两种不同亚型病毒共同感染一宿主细胞，两者的基因片段发生遗传重组；(3)RNA重组。来自不同宿主的流感病毒在同一宿主体内发生基因交替；(4)缺损性病毒颗粒的产生等。其可使流感病毒的抗原性和致病性发生改变。A型流感病毒每个核苷酸在复制周期中的突变率约是1．5×10～，与其它RNA病毒的突变率相似。抗原性变异是A型流感病毒常见的一种自然变异。在A型流感病毒中，抗原漂移是由HA或NA基因发生点突变引起的，其中HA基因的突变率最高，HA发生变异可能与抗体的压力筛选有关，但其变异的准确机制还不完全清楚，有待于进一步研究。

2 材料准备与操作方法

2.1  材料准备

    样品:常德市各县市区督查大户及散养户送检动物血清

    器材: 大孔塑料板，1mL吸管或1mL移液管

    试剂: 禽流感血凝抑制试验抗原、阳性血清及阴性血清为青岛易邦生产，生产批号分别为20101203、201010233及201010223 ，生理盐水

2.2 操作方法

2.2.1 血凝试验和血凝抑制试验原理

原理：  一些动物红细胞(如鸡、等)有流感病毒受体，遇流感病毒可产生红细胞凝集现象，简称血凝。若将特异性抗体与流感病毒(血凝素)预先作用后再加入红细胞则不产生凝集，称为血凝抑制现象。用定量血凝素与不同稀释度血清抗体作用后，能完全抑制血凝的最高稀释度，即为血凝抑制抗体效价。

2.2.2 试验准备

流感病毒血凝素制备：流感病毒接种鸡胚后48h收获的尿囊液，加入1/10000硫柳汞防腐。为了延迟尿盐沉淀可先用无菌生理盐水做等量稀释，置4℃备用。

鸡红细胞悬液的制备：从静脉或心脏抽取正常健康鸡血，保存于阿氏(Alsevr＇s)液中，置4℃保存。用前以生理盐水洗3次，末次经2000r/min离心10min，将红细胞用生理盐水配成1％浓度。

     血凝素滴定：将流感病毒血凝素在大孔塑料板内用生理盐水从1∶5开始做系列倍比稀释，每孔0.25mL再加入等量1％鸡红细胞，摇匀，置室温或4℃30～45min后观察结果，以出现十十血凝的血凝素最高稀释度为其血凝效价，即为1个血凝单位，实验时采用4个血凝素单位。

2.2.3 血凝试验（HA）试验步骤：

    取96孔板，按以下步骤操作：

1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照； 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。4、室温静置10-30分，观察结果。（见附录1）5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。

2.2.4血凝抑制试验（HI）

 取一96孔板，按以下步骤操作：1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀； 4、室温静置20min。5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。6、室温静置10-30分，观察结果。（见附录2）7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价，用2n表示。

2.2.5 结果观察

观察结果时将血凝板倾斜数十秒钟，待阴性孔内红细胞自由下滑呈泪滴状时读结果。以出现完全抑制的血清最高稀释度的倒数为抗体的效价。在检测患者双份血清时需在同一次试验中进行，并以恢复期血清抗体效价较急性期抗体效价升高4倍或4倍以上为阳性。

3. 结果与分析

3.1检测结果

常德市市2010年上半年共监测养鸡规模场42户，散养户39户，禽流感免疫抗体合格率分别为92%、73%，养鸭规模场8户，散养户3户，禽流感免疫抗体合格率67%、99%。     

表1  2010年上半年县市区养殖户免疫抗体监测结果     

Table 1    In the first half of 2010 XianShiOu farmers immune antibody monitoring results

3.2免疫抗体监测情况

表2   全市家禽免疫抗体监测情况统计表 单位：个、羽 监测病种：AI

    Table 2   The poultry immune antibody monitoring conditions TAB  unit;one,plume

3.2.1免疫效果分析

    （1）从监测免疫效果看：禽流感强制免疫病种的抗体水平都比往年有较大提高，达到了国家标准，这体现了我市强制免疫防控措施已基本落实到位，各种疫苗的免疫效果基本稳定，我市畜禽场及散养户实行的免疫程序是可行的。

   （2）监测结果表明：我市畜禽规模场免疫抗体水平较散养户畜禽抗体水平高，分析其原因：第一、规模养殖场饲养管理水平较散养户饲养管理水平高，动物的营养供给比较合理，免疫程序科学，为机体产生高水平的免疫抗体提供了物质基础。第二、规模养殖场畜禽有的进行了第二次加强免疫，如蛋禽场，种畜场家畜。而散养户畜禽免疫随意性强，根本无法确保一年两次免疫，而且免疫也存有较大漏动。第三，散养户畜禽免疫由于路途较远等原因，存有许多影响疫苗效果因素，如温度、剂量等因素。据此，以后我们必须多加强散养户免疫督查工作，确保免疫工作全面到位。

   （3）监测结果表明：强制免疫病种的免疫抗体水平虽然都达到了国家标准，但禽流感的防治依旧是个薄弱环节，本次监测样品散养户合格率只为73%，据调查，由于去年免疫出现许多副反应，防疫员为了减少麻烦，减少了免疫剂量，导致抗体水平偏低。

4.结论与讨论

4.1检验结论

    虽然我市到目前为止没有发生重大动物疫情，但防控形势依然严峻，我市。养殖户对疫病防控的认识不够。大多数小规模养殖场和散养户防控措施不到位，饲养管理粗旷，给我市重大动物疫病防控带来隐患。“双报双检”制度难以全面落实到位，给补免造成一定的难度，其次难以杜绝从有疫地方引进畜禽，导致防控形势不容乐观。

4.2.禽流感的防治

4.2.1 禽流感的传播途径

禽流感主要通过水平传播，即通过易感禽类与感染禽类的直接接触或与病毒污染物的间接接触，例如被污染的饮水、飞沫、饲料及其蛋筐、蛋盘、气管、气囊、鼻腔、眼结膜、口腔、泄殖腔、腹腔及静脉等途径感染鸡群。因此自然传播中通过消化道、呼吸道、眼结膜及损伤皮肤等都有可能受到感染。禽流感病禽可以从呼吸道、结膜和消化道排出病毒，感染方式包括呼吸道感染、机械性传染。目前为止，还未有证据表明禽流感有垂直感染的传染途径(种鸡～种蛋一雏鸡)的危险性，但种禽场的禽类受到感染时，所产的蛋和孵出的雏禽，应全部销毁。

4.2.2 对禽流感加强防范

    禽流感病毒主要是由候鸟迁移传播，我国位于太平洋的西岸、亚洲大陆外缘，正好在东亚候鸟南迁北返时的主要路径上，且位居中途站，是候鸟必到地区。自亚洲暴发禽流感以来，每临秋冬，我国都应非常警戒。防止高致病性禽流感病毒传人我国，动植物检疫机构应对进出我国的禽类进行严格的检疫，并对输出地的情况有所了解，重点的检疫物包括：家禽、野禽、观赏鸟类、雏鸡、雏火鸡及其他孵化出来的禽类，禽种蛋、精液、禽肉、来自禽类的病料及生物制品等可能带病毒的禽类及相关产品。对鸡群进行严密系统的免疫接种，尤其是提高新城疫及传染性喉气管炎的免疫力，可以大大地降低禽流感引起的损失。禽流感病毒没有正常的稳定性，对常用消毒药物都较敏感，而杀灭禽流感病源的消毒药物很多，可用于场地及用具消毒。在没有发病的地区应特别注意防范，最好的办法是加强消毒，也就是说应用消毒药对可能发生的环境进行消毒，杀死环境中病原微生物，切断其传播途径，阻止病的发生。一旦发生时也利用此方法，杀死病鸡排出体外的病原体，也能达到切断传播途径的作用，阻止疫情扩散。本病流行，如有的鸡场严格做好消毒工作，(包括人员、用具、禽舍环境)，至今没有发生本病。这说明了消毒的作用和重要性。目前出售的消毒药如新的过氧乙酸等都可以。本病流行时，如继发和混合感染时，可引起鸡的死亡率提高，因此在流行过程中一定要防止继发，可以应用杀菌和抗病毒的药物。一方面可杀菌防止细菌性继发感染，另一方面可以抑制病毒的复制，起抗病毒的作用，但应用这类药物时必须早期或预防性应用，如果用晚了效果不理想。做好此环节也可以大大减少损失，使产蛋功能较快恢复。如果一旦感染上本病时，除加强上述两种措施之外，可以在饲料中添加一些免疫增强剂如维生素C、E，补一些硒或中药，提高其机体抵抗力，使病恢复快些。本病流行和病死鸡处理不当有很大关系，所以发现本病时，严禁病鸡流人市场，必须及时淘汰处理病死鸡，阻止扩散。

4.2.3 阻止流感病毒的传入

    养禽场要贯彻好卫生防疫制度，根据禽流感的流行特点，要求其贯彻好卫生防疫制度，避免家禽和野生鸟类接触，尤其是避免与水禽如鸭、鹅、野鸭等接触。采取封闭式饲养，严防野鸟从门、窗进入禽舍；防止水源和饲料被野禽粪便污染。养禽场的选址要远离水禽、野生鸟类栖息的河道、湖泊等，并且周围不饲养鸭、鹅等家禽。养禽场内不能饲养狗、猫等宠物以及其他家禽或笼养鸟。

4.2.4 加强疫苗注射

    因为本病血清亚型多，而且各地流行的血清型差异比较大，血清型不对用疫苗免疫不起作用，此为疫苗还没有广泛得到使用的原因之一。所以要应用疫苗预防，应根据当地流行的毒株制成多价疫苗才能起到保护作用。哈尔滨兽医研究所也在研制多价灭活苗，如果血清型相同的效果是好的，可以酌情应用。禽流感病以空气传播为主，随着病鸡的流动，排毒污染空气通过呼吸道而感染，因此传播很迅速，一旦感染上全群鸡可引起暴发，甚至波及到邻近的鸡场和乡村养鸡户。根据传染病防治理论，疫苗免疫是控制禽流感等疫情的关键环节、主动措施和最后防线。

4.2.5 , 严格消毒制度

    从理论上说，疫情暴发最初的2~3星期最为关键。如能在这个阶段及时遏制疫情蔓延，后果将大有不同。因此，无论是发生禽流感或没有发生禽流感，都应对养禽场生产区设立消毒设施，对进出车辆彻底清洗、消毒；饲养人员进入生产区应更衣、帽及鞋靴，淋浴、更衣；严格杜绝其他养禽场人员参观；定期对禽舍及周围环境进行消毒；定期消灭养禽场内有害昆虫如蚁、蝇等和鼠类；死亡禽类必须焚烧或深埋；养禽场坚持自繁自养和全进全出的饲养方式，在引进禽种及其产品时，一定要来自无禽流感的养禽场；做好禽类饲养管理。提高禽只的抗病力，注意秋冬、冬春之交季节气候变化，做好保暖防寒工作。消毒前必须清除污物、粪便、饲料、垫料等，而且要清除干净，不然消毒就达不到效果。必须选用对禽流感病毒有效的消毒药品，而且要选用酸碱2种消毒药交替使用；备有喷雾器、火焰喷射枪、消毒车辆、消毒防护器械(如El罩、手套、防护眼镜、防护靴等)、消毒容器等。养禽场的金属设施设备的消毒，可采取火焰、熏蒸等方式消毒。养禽场圈舍、场地、车辆等，可采用消毒液清洗、喷洒等消毒方式，养禽场的饲料、垫料等，可采取深埋发酵处理等消毒方式。饲养、管理等人员，可采取淋浴等方式消毒，饲养、管理人员的衣帽鞋等可能被污染的物质，可采取浸泡，高压灭菌等方式处理。疫点内办公区，饲养人员的宿舍，公共食堂等场所，可采用喷洒的方式消毒。对屠宰加工，贮藏等场所的消毒可采取相应的方式进行，避免可造成有害物质的污染。

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