研究意义
目前,高血压病(essential hypertension, EH)已成为一个重要的世界性健康问题。具最新统计学数据显示全世界成人中高血压的患病率已达25%~35%,其患病总数已接近10.0亿人。2006年全国心血管病年度调查报告指出我国成人中EH患病率已超过18.8%,全国已有近2.0亿患者。流行病学研究表明EH严重威胁着人类的生命健康,它是多种心脑血管疾病的重要病因和危险因素,可严重影响多种重要脏器如心、脑、肾等的结构和功能[1]。EH发病机制至今尚未完全阐明,现认为是由多基因和环境因素共同作用所致的复杂性疾病。但截止目前有关EH的发病机制仍不是十分明确,因此进一步深入探索高血压的发病机制,从分子水平上开展对高血压致病或易感基因的研究是一项十分迫切且具有重要现实意义的课题。
原发性高血压发病的遗传因素,即家族关系已被多年医疗实践所证实。高血压患者的家族倾向在生命早期已经建立,父母均患高血压,其子女发病率达46%;父母一方患高血压,子女发病率达28%;父母血压正常,子女发病率仅达3%。动物实验研究已成功地建立了遗传性高血压大鼠模型,繁殖几代后几乎100%发生高血压。随着人类基因组计划的完成,遗传基因的研究进入了后基因组时代。一个以定位、识别和克隆原发性高血压的易感基因为研究重点的高血压基因研究正在迅速发展。这一研究旨在研究梅州地区人群原发性高血压的遗传状态,如获成功将对原发性高血压的临床分型、预后判断、个体化治疗和易患者的早期检出及预防等产生影响。
梅州人吃盐多、饮食偏咸。据统计,梅州2012年共消耗食盐19450吨,按常住人口计,平均每人每天食盐的摄入量为12.4克,远远超过每人每天6克的健康标准,其中丰顺饮食口味最重,全县常住人口盐的摄入量是每人每天14.15克。食盐摄入量多是引发人们患高血压、心脏病、脑中风等疾病的重要原因之一。据广东省慢病基本公共卫生服务信息报表统计,2012年12月,梅州市约有43万多名高血压患者,患病的主要原因之一是盐吃得太多,但患病余当地人群独特基因谱系的关系尚不清楚。本课题探讨梅州地区客家人群原发性高血压发病的部分遗传机制,为临床EH的预防提供更科学的依据。
国内外研究现状分析
大量流行病学资料显示EH的患病率及发病率不仅存在地区差异(一般认为发达国家明显高于发展中国家,城市明显高于农村等),并且还存在种族差异,比如有研究报道美国非洲后裔人高血压的发病率为白色人种的大约两倍[2]。EH的发生是由遗传和环境等多种因素共同作用的结果,但遗传因素占主导地位,其所占的比例可高达30%~50%[3]。遗传因素的发生又包含着多个基因,每个基因各自起着不同的作用。国内外已有不少这方面的报道,例如有研究AGT(血管紧张素原)、肾素、ACE(血管紧张素转换酶)基因变异与EH关系的,也有研究AGTR1(血管紧张素Ⅱ受体1)、AGTR2(血管紧张素Ⅱ受体2)及β1肾上腺素受体等[4-6]基因变异与EH关系的,但目前仍有大量基因变异其在EH发生发展中所起的作用还是未知,尚有待于人们进一步的研究。高血压遗传学研究的一个主要任务就是努力去寻找这些与EH致病有关联的基因。人类基因组测序工作显示在基因组中最普遍的变异是单个碱基的突变[7],即单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)。单核苷酸多态性主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列的多态性,其中最少的一种在群体中的频率不小于1%。在基因组DNA中任何区域的碱基都有可能发生突变,因此SNP即有可能发生在编码区内也有可能发生在非编码序列上。一般情况下位于编码区域的SNP比较少,其变异率仅为周围序列的1/5,但它在遗传性疾病的研究中却具有重要意义,因为位于调控区或编码区的SNP很有可能会引起基因功能的改变、表达产物量的变化甚至可造成蛋白质结构的改变等。
目前研究显示SNP具有稳定的遗传特性,它在基因定位、遗传疾病和人类起源等理论研究中具有重大意义。近年来随着分子生物学技术的快速发展,对于功能基因SNP的研究越来越广泛,SNP的研究在筛选和保护疾病易感人群并采取有效干预措施等方面具有十分重要的意义。脂联素(adiponectin,APN)一种由脂肪细胞特异性分泌的激素蛋白,具有抗动脉粥样硬化、改善胰岛素抵抗、降血糖、抗炎等多种功能[8,9]。它包含244个氨基酸,分子量为30KDa,结构上与补体因子C1q和胶原Ⅷ-Ⅹ及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)具有高度同源性,是可溶性防御性胶原家族中的一员。一级序列分析结果显示它包含4个结构域:氨基端的信号序列(18个氨基信号肽)、非同源序列、胶原结构区及羧基末端的球形区,其中球形结构域是脂联素发挥功能的主要部分,具有药理学活性。就目前所知,人血浆脂联素存在一系列的多聚体复合物:低分子量脂联素(LMW)三聚体、中分子量脂联素(MMW)六聚体及高分子量脂联素(HMW)多聚体。其中三聚体是脂联素的基本结构形式,为球丙状结构;六聚体是通过二硫键将2个相邻的三聚体的球形结构域和一个单一的胶原柄结合形成;而高相对分子质量多聚体则是由4~6个三聚体结合装配而成。脂联素主要是以六聚体和多聚体的形式存在于血浆中,不同多聚体具有不同的信号转导途径,所起的生物学作用也不尽相同。人脂联素基因属单拷贝基因,该基因定位于染色体3q27(此区域有较大频率的基因多态性。并且全基因组扫描显示该区域同时又是2型糖尿病、动脉粥样硬化及其他心血管疾病的易感区域,因此我们推测该区域基因多态性与以上多种疾病的发生和发展可能有关联),全长约17Kb,包括3个外显子和2个内含子[10],其中外显子1为非编码区,外显子2编码信号序列、非螺旋功能区及胶原结构的大约1/2,外显子3编码胶原区的另一半及整个球状区。此基因的调节序列含有公认的启动子元件(包括2834bp的核苷酸),但不是典型的胸腺嘧啶核苷-腺嘌呤核苷-胸腺嘧啶核苷-腺嘌呤核苷(TATA)盒。脂联素基因的转录一般是从接近5’端的胞嘧啶开始,多肽编码区是从外显子2起始处开始,在外显子3起始处结束。通过对脂联素基因序列分析显示人脂联素基因中存在相当数量的SNP位点,这些位点可分布在5’非编码区域、外显子、内含子及3’非编码区域等[11]。近期有报道提出脂联素水平及部分基因多态性位点可能是EH等心血管疾病的易感因素。目前不少学者把研究的焦点集中在了对脂联素基因外显子、内含子及启动子区域基因多态性的研究上[12-14],以上区域中比较受关注的位点有276G/T、45T/G、164T等。通过他们的研究可以得出如下结论:部分脂联素基因多态性可影响血浆脂联素水平及代谢类型,并与糖尿病、EH及其他心血管疾病的发生发展密切相关,但存在区域和种族差异。
TGF-β1是具有多种生物学活性的细胞生长因子,可抑制有扩张血管作用的一氧化氮的产生,从而增加缩血管物质内皮素-1的表达而导致血压升高[12]。有研究显示,原发性高血压患者血TGFβ1水平显著升高[13]。人类TGFβ1基因定位于第19号染色体长臂,它含有7个外显子和6个内含子,其中位于信号肽序列区第1外显子的869T/C(Leu/Pro)位点存在基因多态性,这种多态性通过调控TGFβ1的转录和表达,进而影响TGFβ1相关疾病的发生和转归。近年来,国内学者对TGFβ1869T/C基因多态性与EH的关系进行了一些研究,不同的研究所得结果存在一定一致性,但不尽相同[5-8]。
当前需要解决的主要问题
原发性高血压(EH)是一种严重威胁人类健康的的心血管疾病,高血压可引起脑卒中、心肌梗死等急重症,具有较高的致死率和致残率。研究表明,高血压是由环境因素和遗传因素共同作用的结果。随着测序技术的快速发展,高血压的遗传因素研究取得了巨大的进步。近年来,通过大规模人群测序,科学家在欧洲人群中发现一些新的高血压相关位点,然而其在中国人群的分布和作用并不清楚。考虑到高血压与遗传因素密切相关,而梅州客家人有个比较独特的基因族谱起源,因此,本研究致力于开展梅州客家人群TGF-β1基因T869C多态性与EH相关性的病例对照研究,以期得出较为有针对性的结论,为客家人临床EH的预防提供更科学的依据。
目前关于TGF-β1基因T869C和G915C多态性与高血压关系的研究国内外均不多,且不同研究组的结果并不完全相同,考虑由于基因多态性存在种族、民族及地域间的差异,为此本研究应用PCR-RFLP技术对我国梅州地区客家人群TGF-β1基因T869C和G915C多态性进行分析,研究其基因多态性与原发性高血压发病是否相关,进而探讨梅州地区客家人群原发性高血压发病的部分遗传机制,为进一步研究高血压的发病机理提供理论依据。
主要参考文献
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